პროდუქტები

დნმ-ის ფუძეების ოქსიდაციური დაზიანება ჩვეულებრივ იწვევს დაჟანგული პურინების წარმოქმნას, განსაკუთრებით 7,8-დიჰიდრო-8-ოქსოგუანინი (8-oxoG) და 7,8-დიჰიდრო-8-ოქსოადენინი (8-oxoA), პირველი არის კარგად- ცნობილი მუტაგენური დაზიანება.ვინაიდან 8-oxoG ადვილად ექვემდებარება შემდგომ დაჟანგვას ნორმალურ ფუძებთან შედარებით, დნმ-ის სინთეზის დროს ფუძის ჩასმა 8-oxoG-ის დაჟანგული ფორმის საპირისპიროდ გამოკვლეული იყო in vitro.სინთეზური შაბლონი, რომელიც შეიცავს ერთ 8-oxoG დაზიანებას, პირველად დამუშავდა სხვადასხვა ერთელექტრონული ოქსიდანტებით ან ჟანგბადის ერთჯერადი პირობებში და შემდეგ დაექვემდებარა პრაიმერის გაფართოებას, რომელიც კატალიზირებულია Klenow ფრაგმენტის ეგზო- (Kf exo-), ხბოს თიმუსის დნმ პოლიმერაზა ალფა (პოლ ალფა). ) ან ადამიანის დნმ პოლიმერაზა ბეტა (პოლ ბეტა).წინა მოხსენებებთან შესაბამისად, dAMP და dCMP ჩასმულია შერჩევით 8-oxoG-ის საპირისპიროდ სამივე დნმ-პოლიმერაზასთან.საინტერესოა, რომ აღმოჩნდა, რომ 8-oxoG-ის დაჟანგვა იწვევს dAMP-ისა და dGMP-ის შეყვანას დაზიანების საპირისპიროდ Kf exo--ით, პრაიმერის გაფართოების გარდამავალი ინჰიბიციით ან მოდიფიცირებული ბაზის ადგილზე.გარდა ამისა, დაზიანება წარმოადგენს ბლოკს დნმ-ის სინთეზის დროს პოლ ალფა და პოლ ბეტა.8-oxoA-ით შეცვლილი შაბლონის ოლიგონუკლეოტიდის ექსპერიმენტებმა აჩვენა, რომ 8-oxoA და 8-oxoA dTMP-ის პირდაპირი ჩასმის დაჟანგული ფორმა Kf exo--ით.8-oxoG-ის შემცველი ოლიგონუკლეოტიდების მასის სპექტრომეტრიული ანალიზი IrCl62-ით დაჟანგამდე და შემდეგ - შეესაბამება ძირითადად 8-oxoG ადგილის დაჟანგვას, რაც იწვევს გუანიდინოჰიდანტოინის ნაწილს, როგორც ძირითად პროდუქტს.არ მოიპოვება არანაირი მტკიცებულება აბაზიური უბნების წარმოქმნის შესახებ.ეს შედეგები აჩვენებს, რომ 8-oxoG-ის დაჟანგული ფორმა, შესაძლოა, გუანიდინოჰიდანტოინი, შეიძლება მიმართული იყოს dNTP-ების არასწორი წაკითხვისა და არასწორ ჩასმაში დნმ-ის სინთეზის დროს.თუ ასეთი პროცესი მომხდარიყო in vivo, ეს იქნება წერტილი მუტაგენური დაზიანება, რომელიც იწვევს G-->T და G-->C ტრანსვერსიებს.თუმცა, 8-oxoA-ს შესაბამისი დაჟანგული ფორმა უპირველეს ყოვლისა აჩვენებს T-ის სწორ ჩასმას დნმ-ის სინთეზის დროს Kf exo--თან.