პროდუქტები

სხვა დადებითი ჯაჭვის რნმ ვირუსების მსგავსად, ტომბუსვირუსები მრავლდება მემბრანასთან დაკავშირებული ვირუსული რეპლიკაზის კომპლექსით (VRC).VRC შედგება p92 ვირუსით კოდირებული რნმ-დამოკიდებული რნმ პოლიმერაზასგან (RdRp), ვირუსული p33 რნმ-ის ჩაპერონისგან და რამდენიმე კოოპტირებული მასპინძელი ცილისგან.იმისათვის, რომ გახდეს ფუნქციური RdRp მისი ტრანსლაციის შემდეგ, p92 რეპლიკაციის ცილა უნდა იყოს ჩართული VRC-ში, რასაც მოჰყვება მისი გააქტიურება.ჩვენ ადრე ვაჩვენეთ უჯრედისგან თავისუფალი საფუარის ექსტრაქტზე დაფუძნებული ანალიზით, რომ პომიდვრის ბუჩქოვანი stunt ვირუსის (TBSV) RdRp გააქტიურება მოითხოვს ხსნად მასპინძელ ფაქტორ(ებ)ს.ამ სტატიაში ჩვენ ვიდენტიფიცირებთ ფიჭური სითბოს შოკის პროტეინს 70 (Hsp70), როგორც კოოპტირებულ მასპინძელ ფაქტორს, რომელიც საჭიროა N-ტერმინალურად შეკვეცილი რეკომბინანტული TBSV RdRp-ის გასააქტიურებლად.გარდა ამისა, Hsp70 ფუნქციის მცირე მოლეკულაზე დაფუძნებული ბლოკირება თრგუნავს რნმ-ის სინთეზს ტომბუსვირუსის RdRp in vitro.გარდა ამისა, ჩვენ ვაჩვენებთ, რომ ნეიტრალური ფოსფოლიპიდები, კერძოდ, ფოსფატიდილეთანოლამინი (PE) და ფოსფატიდილქოლინი (PC), აძლიერებენ RdRp აქტივაციას in vitro.ამის საპირისპიროდ, ფოსფატიდილგლიცეროლი (PG) ავლენს ძლიერ და დომინანტურ ინჰიბიტორულ ეფექტს in vitro RdRp აქტივაციაზე.ჩვენ ასევე ვაჩვენეთ, რომ PE და PC ასტიმულირებენ RdRp-ვირუსის პლიუს-ჯაჭვის რნმ [(+)RNA] ურთიერთქმედებას, ხოლო PG აფერხებს ვირუსული რნმ-ის RdRp-თან დაკავშირებას.ტომბუსვირუსის RdRp აქტივაციაში სხვადასხვა ფოსფოლიპიდების მასტიმულირებელ და ინჰიბიტორულ როლებზე დაყრდნობით, ჩვენ ვთავაზობთ, რომ მიზანმიმართული სუბუჯრედული მემბრანების ლიპიდური შემადგენლობა შეიძლება გამოყენებულ იქნას ტომბუსვირუსების მიერ ინფექციის მიმდინარეობისას ახალი VRC შეკრების დასარეგულირებლად. ვირუსზე კოდირებული რნმ-დამოკიდებული რნმ პოლიმერაზა (RdRp), რომელიც პასუხისმგებელია ვირუსული რნმ-ის შთამომავლების სინთეზზე რამდენიმე დადებითი ჯაჭვის რნმ ვირუსის ინფიცირებულ უჯრედებში, თავდაპირველად არააქტიურია.ეს სტრატეგია, სავარაუდოდ, თავიდან აიცილებს ვირუსული რნმ-ის სინთეზს ციტოზოლში, რაც სწრაფად გამოიწვევს რნმ-ით გამოწვეული უჯრედული ანტივირუსული რეაქციების ინდუქციას.მემბრანასთან დაკავშირებული რეპლიკაზის კომპლექსის აწყობის დროს, ვირუსული RdRp აქტიურდება არასრულიად გაგებული პროცესის მეშვეობით, რაც RdRp-ს რნმ-ის სინთეზის შესაძლებლობას აძლევს.TBSV RdRp-ის გამოყენებით, ჩვენ ვაჩვენებთ, რომ კოოპტირებული ფიჭური Hsp70 ჩაპერონი და ნეიტრალური ფოსფოლიპიდები ხელს უწყობენ RdRp აქტივაციას in vitro.ამის საპირისპიროდ, ფოსფატიდილგლიცეროლს (PG) აქვს დომინანტური ინჰიბიტორული ეფექტი in vitro RdRp აქტივაციაზე და RdRp-ვირუსული რნმ-ის ურთიერთქმედებაზე, რაც ვარაუდობს, რომ მემბრანული მიკროდომენი RdRp-ის გარშემო დიდად მოქმედებს მის უნარზე რნმ-ის სინთეზისთვის.ამრიგად, ვირუსული RdRp-ის გააქტიურება, სავარაუდოდ, დამოკიდებულია მასპინძლის მრავალ კომპონენტზე ინფიცირებულ უჯრედებში.