პროდუქტები

5-ფტორურაცილის (5-FU) რამდენიმე მეტაბოლიტის და ორი ენდოგენური მონოფოსფატის ნუკლეოტიდის კონკრეტულად რაოდენობრივად გასაზომად, ჩვენ შევიმუშავეთ ორიგინალური მეთოდი, რომელიც დაფუძნებულია თხევადი ქრომატოგრაფია-ტანდემური მასის სპექტრომეტრიაზე (LC-MS/MS).ეს ანალიზი საშუალებას აძლევდა განესაზღვრა: (i) 5-ფტორ-2'-დეოქსიურიდინ-5'-მონოფოსფატის (5-FdUMP) 5-FU ან 5-ფტორ-2'-დეოქსიურიდინის (5-FdUrd) უჯრედშიდა წარმოება. , (ii) 5-FdUMP კონცენტრაციის გავლენა უჯრედშიდა 2'-დეოქსიურიდინ-5'-მონოფოსფატზე (dUMP)/თიმიდინ-5'-მონოფოსფატზე (TMP) თანაფარდობაზე და (iii) 5-FdUMP-ის სეკრეციის მასშტაბზე და 5-FU ადამიანის კულტივირებული უჯრედებიდან ABC ტრანსპორტერებით.ჩვენს ექსპერიმენტულ პირობებში, უჯრედები ინკუბირებული იყო 5-FU ან 5-FUrd-ით.შემდეგ, ფიჭური ცილები დალექილი იყო მეთანოლით.ეს პროცედურა უზრუნველყოფს მაღალი ექსტრაქციის აღდგენას.გარდა ამისა, უჯრედებიდან 5-FU და 5-FdUMP სეკრეციის გასაზომად, ჩვენ ჩავატარეთ ამ მოლეკულების რაოდენობრივი განსაზღვრა კულტურის გარემოში.მედია იყო ან უშუალოდ ინექცია (5-FU) ან ჩატარდა მყარი ფაზის ექსტრაქცია Oasis Wax-ის ექსტრაქციის კარტრიჯის გამოყენებით (5-FdUMP).ანალიზების გამოყოფა განხორციელდა dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 მმ × 2.1 მმ id) სვეტზე იზოკრატიული რეჟიმით ამონიუმის ფორმატის ბუფერის/მეთანოლის/წყლის (5/5/90, ვ/ვ) მობილური ფაზის გამოყენებით.გაშვების დრო არ აღემატებოდა 6,2 წუთს.ანალიზები იონიზირებული იყო ელექტროსპრეის ინტერფეისში უარყოფითი იონის რეჟიმში.ჩვენ დავადასტურეთ მეთოდი 2,5-150 ნგ მლ -1 დიაპაზონში ნაერთების მიხედვით.ცვალებადობა შიდა და ანალიზს შორის იყო 10%-ზე დაბალი შვიდი დღის განმავლობაში.ყველა ნაერთი იყო სტაბილური უჯრედებში ან კულტურის გარემოში, როდესაც ნიმუშები ინახებოდა -20 °C ტემპერატურაზე მინიმუმ ორი კვირის განმავლობაში და სამი გაყინვა-დათბობის ციკლის შემდეგ.ორივე მედიაში მატრიცული ეფექტი არ დაფიქსირებულა.