პროდუქტები

ფლუორესცეინის და ფლუორესცეინის მეთილის ეთერის მონოგალაქტოპირანოზიდები: სინთეზი, ფერმენტული ჰიდროლიზი ბიოტნილირებული β-გალაქტოზიდაზას მიერ და ტრანსლაციის დიფუზიის კოეფიციენტის განსაზღვრა.

ფლუორესცეინის მონოგლიკოზიდები (d-გალაქტოპირანოზიდი (FMG) და d-გლუკოპირანოზიდი) და მათი მეთილის ესტერი (MFMG) მომზადებულია აცეტობრომოგლუკოზის/გალაქტოზისა და ფლუორესცეინის მეთილის ეთერისგან კარგი მოსავლიანობით.ჩატარდა გალაქტოს წარმოებულების ფერმენტული ჰიდროლიზის ექსპერიმენტები (ბიოტინილირებული β-გალაქტოზიდაზას გამოყენებით) და გამოითვალა კინეტიკური პარამეტრები.ჰიდროლიზის დროს დაფიქსირდა ფლუორესცენციის ინტენსივობის 15-20-ჯერ მატება.დაფიქსირდა ფლუორესცენციის ხაზოვანი ზრდა მოკლე დროში და სუბსტრატის დაბალი კონცენტრაცია, რაც ამ ნაერთებს გახდის სასარგებლო და მგრძნობიარე ზონდებს გალაქტოზიდაზებისთვის.მაიკლის-მენტენის მუდმივი (Km) მნიშვნელობის სიდიდე MFMG-სთვის უფრო მაღალია, ვიდრე FMG-ისა, რაც მიუთითებს ფლუოროგენული სუბსტრატის შესაძლო კონფორმაციულ ცვლილებაზე.კმ მნიშვნელობა ბიოტინილირებული β-გალისთვის FMG-ით უფრო დაბალია, ვიდრე მშობლიური ფერმენტისთვის.ეს დაკვირვება მიუთითებს ბიოტინილირებული ფერმენტის უფრო მაღალ სუბსტრატულ აფინურობაზე მშობლიურ ფერმენტთან შედარებით.გაზომილი იყო ტრანსლაციის დიფუზიის კოეფიციენტები, როგორც ფლუოროგენული სუბსტრატებისთვის, ასევე ორივე პროდუქტისთვის, ფლუორესცენციის კორელაციური სპექტროსკოპიის გამოყენებით.ფლუოროგენული სუბსტრატებისა და ფერმენტული ჰიდროლიზის პროდუქტების ტრანსლაციური დიფუზიის კოეფიციენტები გაზომილია მსგავსებად, 3,5–4,5 × 10−10 მ2 s−1 დიაპაზონში.ამრიგად, ფერმენტული კინეტიკის გაძლიერება ან შეფერხება სუბსტრატისა და პროდუქტის მთარგმნელობითი მობილურობის განსხვავების გამო არც ისე აშკარაა.