პროდუქტები

ახალი მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიული ანალიზი გლიკოზილტრანსფერაზებისთვის, რომელიც ეფუძნება ანტრანილის მჟავას დერივატიზაციას და ფლუორესცენციის გამოვლენას.

ანალიზები შემუშავდა 2-ამინობენზოინის მჟავას (2AA; ანტრანილის მჟავა, AA) უნიკალური მარკირების ქიმიის გამოყენებით, როგორც β1-4 გალაქტოზილტრანსფერაზას (GalT-1) და α2-6 სიალილტრანსფერაზას (ST-6) აქტივობის გასაზომად მაღალი ხარისხის სითხით. ქრომატოგრაფია (HPLC) ფლუორესცენციის გამოვლენით (Anumula KR. 2006. Advances in fluorescence derivatization მეთოდები გლიკოპროტეინის ნახშირწყლების მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიული ანალიზისთვის. Anal Biochem. 350:1-23).N-აცეტილგლუკოზამინი (GlcNAc) და N-აცეტილლაქტოზამინი გამოიყენებოდა როგორც მიმღები და ურიდინ დიფოსფატი (UDP)-გალაქტოზა და ციტიდინ მონოფოსფატი (CMP)-N-აცეტილნეურამინის მჟავა (NANA), როგორც დონორები GalT-1 და ST-6, შესაბამისად.ფერმენტული პროდუქტები მონიშნული იყო in situ AA-თი და გამოეყო სუბსტრატებიდან TSKgel Amide 80 სვეტზე ნორმალური ფაზის პირობების გამოყენებით.ფერმენტის ერთეულები განისაზღვრა პიკის უბნებიდან პარალელურად წარმოებული სტანდარტებთან Gal-β1-4GlcNAc და NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.დადგინდა ანალიზების წრფივობა (დრო და ფერმენტის კონცენტრაცია), სიზუსტე (ინტრა და ინტერასეიში) და განმეორებადობა.აღმოჩნდა, რომ ანალიზები სასარგებლოა ფერმენტის აქტივობის მონიტორინგისთვის იზოლაციისა და გაწმენდის დროს.ანალიზები იყო ძალიან მგრძნობიარე და შესრულდა ტოლი ან უკეთესი, ვიდრე ტრადიციული რადიოაქტიური შაქრის გაზომვები.ანალიზის ფორმატი ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას სხვა ტრანსფერაზების აქტივობის გასაზომად, იმ პირობით, რომ ნახშირწყლების მიმღებები შეიცავენ ეტიკეტირების შემცირების ბოლოს.გლიკოპროტეინების მიმღებთა ანალიზი შემუშავდა IgG-ის გამოყენებით.შემუშავებული იყო HPLC პროფილირების მოკლე მეთოდი IgG გლიკანების გამოყოფისთვის (ორჯერადი G0, G1, G2, მონო- და დიზიალირებული), რამაც ხელი შეუწყო GalT-1 და ST-6 აქტივობების სწრაფი დადგენას.გარდა ამისა, პროფილირების ეს მეთოდი გამოსადეგი უნდა იყოს კლინიკურ გარემოში IgG გლიკანების ცვლილებების მონიტორინგისთვის.