პროდუქტები

კოლიცინის E1 არხის დომენის მემბრანული ტოპოლოგია შესწავლილი იყო ფლუორესცენტული რეზონანსული ენერგიის გადაცემით (FRET).FRET მოიცავდა გენეტიკურად დაშიფრულ ფლუორესცენტულ ამინომჟავას (კუმარინი), როგორც დონორი და შერჩევით ეტიკეტირებულ ცისტეინის ნარჩენს, რომელიც დაკავშირებულია DABMI-თან (4-(დიმეთილამინო) ფენილაზოფენილ-4'-მალეიმიდით), როგორც FRET მიმღები.ფლუორესცენტური კუმარინის ნარჩენი ჩართული იყო პროტეინში ორთოგონალური tRNA/ამინოაცილ-tRNA სინთეზაზას წყვილის მეშვეობით, რომელიც საშუალებას აძლევდა შერჩევით ჩაერთოს ნებისმიერ ადგილას კოლიცინის არხის დომენში.თითოეულ ვარიანტში იყო გაჩერებული (TAG) მუტაცია კუმარინის ინკორპორაციისთვის და ცისტეინის (TGT) მუტაცია DABMI მიმაგრებისთვის.1-6 სპირალის შიგნით ექვსი ინტერსელიკულური მანძილი განისაზღვრა FRET ანალიზის გამოყენებით, როგორც ხსნადი, ასევე მემბრანით შეკრული მდგომარეობებისთვის.FRET-ის მონაცემებმა აჩვენა დიდი ცვლილებები 3-6 ხვეულებს შორის სპირალურ დისტანციაში მემბრანული კავშირის საფუძველზე, რაც ახალ ხედვას იძლევა არხის დომენის მემბრანული სტრუქტურის შესახებ.ზოგადად, კუმარინ-DABMI FRET ინტერჰელიკულური ეფექტურობა შემცირდა მემბრანის შეკვრისას, კოლიცინის არხის ქოლგის მოდელზე დაყრდნობით.არხის დომენის დახურული მდგომარეობის სავარაუდო მოდელი შემუშავდა მიმდინარე და ადრე გამოქვეყნებული FRET მონაცემების საფუძველზე.მოდელი გვთავაზობს 1-7 ხვეულების წრიულ განლაგებას საათის ისრის მიმართულებით უჯრედგარე მხრიდან და 1, 6, 7 და 10 ხვეულების მემბრანული ინტერფეისის ასოციაცია ცენტრალური ტრანსმემბრანული თმის სამაგრის გარშემო, რომელიც წარმოიქმნება 8 და 9 ხვეულებით.